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在微生态制剂的发酵生产中,活菌数的含量直接影响到产品的质量,而发酵过程中和活菌数除了菌株及发酵的条件外,培养基的组成是一个重要方面。它提供微生物生长繁殖所必须的营养物质,是菌体繁殖的物质基础。另外,原材料成本占发酵成本30~50%,因此,要选择营养物质的组成比较丰富,成本低廉的原材料,才能提高基质转化率,降低生产成本。
本试验利用正交设计对多种原材料及其浓度进行筛选,从中筛选出适合乳酸菌生长的三组培养基配方,活菌数3#为70亿/ml、6#为67亿/ml、13#为66亿/ml。在此基础上,综合考虑选择了3#培养基在生产中放大培养,其发酵菌数达到100亿/ml以上,基质转化率35%,为工业化生产奠定了基础。 1材料与方法 1.1 材料 1.1.1菌种:鸡源乳酸菌(本研究所分离、鉴定保存) 1.1.2原材料及试剂:酵母粉、葡萄糖、玉米糖浆、微量盐及其他特殊成分;MRS液体培养基,琼脂粉,5NNaOH溶液 1.1.3仪器及设备:三角烧瓶、二重皿、全温振荡培养箱、高压消毒锅、微量移液器、全自动发酵罐等。
1.2方法 1.2.1种子液准备: 取出菌种保藏管用MRS固体培养基划平板进行复苏,37度厌氧培养48h。在平皿上挑取单个菌落接种50mlMRS液体培养基中,在摇床中37度厌氧培养48h。染色、镜检种子液,观察菌体生长情况及有无杂菌生长。 1.2.2正交试验培养基配制; 根据细菌组成的碳氮比来确定原材料的浓度配比,选择5种原材料,确定4个浓度,采用正交表L16(45)共安排16次试验,每个试验配培养基各100ml,调整pH值置150ml三角瓶中消毒,备用。
1.2.3接种与培养: 正交试验种子采用2%接种量,接种后置三角瓶与37度震荡培养。每8h调一次pH值,培养36h用梯度稀释和平板涂布法检测活菌数。 1.2.4发酵中试: 根据正交试验结果,确定配方,采用150升种子罐和1.5吨发酵罐进行中试,培养温度37度,转速120-150转/min,培养时间36-48h,用梯度稀释和平板涂法检测活菌数。 2 结果 2.1通过正交试验,培养36h用梯度稀释和平板涂布法检测活菌数,获得活菌数为70亿/ml、67亿/ml、和66亿/ml的配方。
2.2用3#配方作为大规模中试发酵培养基在全自动发酵罐不中厌氧培养36h,结果活菌数为100~120亿/ml 3 讨论 3.1 本试验采用了正交试验设计法对培养基的原材料进行筛选,该方法能利用有限的试 验获得正确、全面的试验结果,加快了实验进程。 3.2通过正交试验和发酵中试,活菌数超过了实验室培养的菌数,使基质转化率达到35%,降低了生产成本
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