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实验十三 食物中维生素C的提取和含量测定 （2,4-二硝基苯肼法） 【实验目的】 1.熟悉维生素C的生理功能。 2.掌握食物中维生素C的提取和含量测定。 【实验原理】 维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，是具有L-糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。维生素C缺乏时会产生坏血病，因此，又称为抗坏血酸。维生素C分布很广，植物的绿色部分及许多水果（橘类、草莓、山楂、辣椒等）的含量更为丰富。 维生素C具有很强的还原性。易被氧化成脱氢维生素C。脱氢维生素C仍保留维生素C的生物活性，在动物组织内被谷胱甘肽等还原成维生素C。在pH>7.5时，脱氢维生素C易将其分子构造重新排列，使其内酯环裂开，生成没有活性的二酮古洛糖酸。维生素C、脱氢维生素C和二酮古洛糖酸合称为总维生素C。 食物中的总维生素C包括还原型和脱氢型两种形式。食物陈旧，贮存日久以及经过烹调处理的食物，其中有相当一部分维生素C成为脱氢型，此种形态的维生素C仍有85%左右的维生素C活性，所以对这类食物常常测定总维生素C。测定时须将样品中的还原型维生素C氧化成脱氢型维生素C。因脱氢维生素C和二酮古洛糖酸都能与2,4-二硝基苯肼作用生成红色的脎，脎的生成量与总维生素量成正比。于是将脎溶于硫酸，再与同样处理的维生素C标准液比色，可求出样品中的总维生素C的含量。 【器材和试剂】 1. 器材 硏钵、恒温水浴、72型分光光度计、50m1容量瓶、刻度吸管、100m1锥形瓶。 2. 试剂
（1）橘皮。
（2）9N硫酸：25m1浓硫酸 （比重1.84） 缓慢加入700m1蒸馏水中，冷却后稀释至1000mI。 (3)2% 2,4-二硝基苯肼：溶解2g 2,4-二硝基苯肼于100ml 4.5mol/L(9N)硫酸中，过滤。4℃保存。每次用前需再过滤，保存时间限于2周。
（4）85%硫酸：90m1浓硫酸（比重1.84）缓慢加入100mI水中。
（5）1%草酸溶液。
（6）10%硫脲：称取硫脲50g溶于1%500mI草酸中，4℃保存。保存期限2个月。
（7）活性碳：100g活性碳加入750ml 1mol/L(1N)盐酸回流1~2h，过滤，用蒸馏水反复洗涤活性碳至洗涤滤液中无Fe3+为止。然后置烤箱中110℃烘干冷却后置干燥器中备用。
（8）标准维生素C贮存液：精确称取维生素C100mg，以1%草酸溶解并定容至100m1,4℃保存。
（9）标准维生素C应用液：准确吸取标准维生素C贮存液1.0m1置100m1容量瓶中，用1%草酸溶液稀释至刻度，用时现配。 【操作步骤】 1.样品提取 橘皮2g剪碎置硏钵中，按1%草酸10~15 m1，硏磨5~10min，将提取液收集至50 m1容量瓶中，如此重复提取2~3次，最后加1%草酸至50 m1。 2.氧化、脱色 取上述提取液约10m1置于干燥100m1锥形瓶中，加入活性碳0.5g，充分振摇1min后过滤，取约10m1标准液于另一干燥锥形瓶中，加入活性碳0.5g ，同法振摇、过滤。 3.显色：取试管3支，编号，按下表操作： 试剂 空白 标准 测定 样品滤液（ml） 2.5 — 2.5 标准滤液（ml） — 2.5 — 10%硫脲（ml） 1 1 1 2%2,4—二硝基苯肼（ml） 0 1.0 1.0 混匀，置沸水浴中保温10min取出，流水冷却，空白管加2% 2,4—二硝基苯肼1ml。 4.脎的溶解 各管置冷水浴中缓慢加入85%硫酸3.0m1，边加边摇边冷却。加完后混匀，取出试管，室温下放置10min，于500nm波长下进行比色，以空白管凋零，测吸光度值。 【计算】 【附注】
（1）生蔬菜、水果捣匀浆时可能产生泡沫，为定容准确可加数滴戊醇以除去泡沫。
（2）处理活性炭时Fe3+检查法：取活性炭洗涤滤液少许，加数滴5%亚铁氯化钾，若不出现蓝色，示无Fe3+；或加数滴1%硫氰酸钾，若不出现红色，也示无Fe3+。 方法二：维生素C的提取及含量测定中文摘要：目的，1.学习维生素C定量测定的原理和方法。2.进一步熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。3.讨论用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定法的优缺点。4.概括了解维生素C的生理意义及其在新鲜水果中的含量。维生素C能还原2,6-D。2,6-D在碱性条件下为蓝色，在酸性条件下为红色；维生素C易被2,6-D氧化为脱氢维生素C，而2,6-D本身被还原为无色；当维生素C全部被脱氢氧化后，滴入的2,6-D不能被还原，在酸性条件下呈现红色，即表示溶液中的维生素C刚刚全部被氧化，从2,6-D消耗量可以计算出被检样品中维生素C的量。关键词：维生素C；生物样品；测定方法；微量滴定管。 [引言]1.别名：抗坏血酸、维生素丙、Ascorbic Acid .2.性状：白色结晶性粉末；无臭，味酸；久置色渐变微黄；水溶液显酸性反应，易溶于水中，略溶于乙醇，不容于氯仿或*。熔点190~192℃，熔融是同时分解。 3.结构式： 4.发展：著名的诺贝尔奖获得者鲍林发现了维生素C，由此得以发展，目前 ，维生素已成为国际医药与保健品市场的主要大宗产品之一。中国是全球极少数能生产全部维生素品种的国家之一。其中，维生素C在世界国际市场具有举足轻重的地位。5.功能：本品具有多种生理功能，参与氨基酸代谢及肾上腺皮质激素、神经递质、胶原蛋白和细胞间质的合成。可降低毛细血管的通透性、加速血液的凝固、刺激凝血功能、促进铁在肠内吸收、调整血脂、增加抗感染能力。参与...
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