[班级常规培养需注意的问题]常规培养是老师们工作的重点，不同的老师有不同的方法，所以班级常规也有所不同。通过一段时间的观察和经历，我认为在常规培养方面应注意以下几点：1.共同配合，要求一致：三位教师应...+阅读
1、常用玻璃仪器的准备 制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用.
（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用.
（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用.
（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用.其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用.
2、培养基的制备及储存
（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内.加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分.在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏.
（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH.因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃.调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液.当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液.灭菌后e79fa5e98193e78988e69d8331333337623466的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适.因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节.干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证.测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正.调整pH后要加热过滤，使培养基澄清.
（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认.每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管.固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管.平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min.让水蒸汽自然蒸发.斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染.高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用.分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理.液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中.培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定.普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min.含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min.含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌.血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌.高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物.以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好.
香菇培养基配制与灭菌
一、菌种配制适宜香菇一级种的培养基配方是：马铃薯250克、葡萄 糖25克、琼脂20克、清水1000毫升，或者是黄豆粉40克、葡萄糖20克、琼脂20克、清水1000毫升。 用木屑作主料的二级种培养基配方是：木屑78%、麦麸20%、蔗糖1%、石膏粉1%，清水适量，使料水比为1∶1.2。原种再转到相同的培 养基上进行扩大栽培即为栽培种。每瓶原种可接栽培种60~80瓶，菌丝生长 适宜温度范围为5~32℃，以22~25℃最合适，空气相对湿度以70% 为宜。
二、高产栽培技术
1、栽培季节的选择香菇属低温型菌类，菌丝在5~32℃之间均能生 长，人工栽培只要能调节好适宜的温湿度，一年四季均可栽培。但由于菌丝生 长过程不耐高温，子实体发育阶段要求较低温度，且子实体分化阶段要求有较 大的温差等，通常要选择在8~10月份开始接种栽培，到11~12月份就 开始长菇，春节前后进入生产高峰，到了夏季气温高时香菇生长周期结束。
2、培养基的选择及配方目前栽培香菇常用的主料有：木屑、棉籽壳、 甘蔗渣等。现以木屑为主料介绍其高产栽培技术。配料前先将木屑进行发酵，杀死各种杂菌，然后用筛子进行清选将杂物筛出，栽培料配方为：木屑78%、 米糠或麦麸20%，蔗糖1%、石膏粉1%、加水适量，使料水比达到1∶1.2。拌料在干净的水泥地或木板地进行，拌料要非常均匀，茵丝生长时培 养基含水量以50%~55%为宜，菌丝生长偏酸性pH以5.5~6为宜，若培养基偏碱性可加入浓度为3%盐酸溶液进行中和，一般灭菌后pH值会下 降，因此拌料时偏高一点为好。
为防止杂菌污染，配制培养基时可加入0.1 %的多菌灵。
3、装袋灭菌栽培香菇的塑料袋一般为低压聚乙烯或聚丙烯塑料袋，袋 长33~55厘米、宽17~30厘米，装干料1~1.5公斤。装料之前要 用水对栽培袋做密封试验，使用密封好的袋。破损的袋会造成杂茵污染。装袋 时将栽培袋底角折叠成方型，人工装料要一边装一边压实，将料装入袋内3/5处即可。
装料后套上纸环，用塑料将环包严，扎紧袋口，留好接种口以便接 种，在接种口上塞好棉塞。 从拌料装袋到灭菌应在6小时内完成。防止出现灭菌死角。高压灭茵在0.015兆帕压力下保持2小时，常压灭菌要求温度升温快，升到100℃ 时保持10~12小时，闷锅8小时，以彻底灭茵。
4、接种香菇接种要注意做好消毒灭菌，对整个种环境用福尔马林、高 锰酸钾和来苏儿原液进行彻底消毒；②接种的速度要快，防止杂菌侵入和感染，必须一边去棉塞一边接种再迅速把棉塞封上；③接种过程中菌种瓶上口要随时 靠进酒精灯火焰，棉塞拔下时也要在酒精灯火焰上过一下，动作要迅速，茵种 离酒精灯火焰6~8厘米为宜。
5、发菌接种后的栽培袋及时移入25℃的菇棚或发菌室内上架培养，栽培袋排列要紧密。注意调节温度在25℃，空气相对湿度70%。要里外、 上下接受空气、温度等均匀，若发现培养基中有红、黄、绿、黑等斑点均说明 已被杂菌污染应及时捡出。菌丝培养85天长满全袋发育成熟，此时可做块出 菇。菌丝培养90天左右时便可达到生理成熟，可以脱袋出菇。
6、做块出菇茵丝发育成熟后，先脱出塑料袋在高锰酸钾溶液中进行消 毒，然后剥去老菌皮，将菌体搓碎，碎粒约1厘米大小，再用板模做块。板模 规格为长40厘米，宽30厘米，高8厘米。把搓好的菌粒倒入模内压实压平，在栽培架上铺一层薄膜将做好的茵块放好，撤去板模，块与块之间相距4~5 厘米，菌块放好后要盖塑料薄膜，以防水分散失和杂菌侵入。
可通过掀动薄膜 进行通风换气，6天后茵丝生长旺盛，开始徒长。降温并进行强光刺激可使菌 丝倒伏利于转色不形成厚菌皮。
7、脱袋出菇不进行做块出菇的菌袋，可在栽培袋内继续培养，一般接种60~90天的栽培袋菌丝长满整个袋内，开始收缩，培养基与塑料袋出现空 隙时便可脱袋出菇。 脱袋方法将袋口解开，扒开塑料薄膜。根据菌丝成熟情况而定脱袋的多 少。
如果整个菌袋菌丝体膨胀的可将整个袋脱去；如果只有一半膨胀垄起可只 脱去塑料袋的一半，待菌丝长好后再脱去剩余的塑料袋。这时气温不宜超过25℃，以22℃以下较好。菌筒排在菇床上与水平面成70~80°角，盖好 薄膜。
8、菌丝转色茵块菌丝成熟脱袋后要人为使菌丝全面接受空气、光照，使培养基的湿度和营养成分发生变化，菌丝便从营养生长转为生殖生长。
表面 菌丝倒伏形成薄的菌膜并分泌色素，菌丝慢慢由白色变为粉红色再变为棕褐 色，最后全变成似树皮状的褐色菌膜。强光刺激能加快转色，这期间气温控制 在15~22℃，空气相对湿度85%~90%。
9、催菇管理完全转色后进入出菇阶段，香菇在温、湿、光照有变化的 条件下才能结实。必须人为创造冷热、干湿、明暗的不同来刺激菌丝，使菌丝 不断分化膨大而形成原基。
10、出菇香菇子实体成熟大约需7天时间，这个时期的管理：一是要 控制室温15℃，二是干湿交替冷热刺激，三是保持空气相应温度，一般以90%左右为宜。出菇期间应将茵块成“人”字形排放。一次接种能长三茬菇。
关于微生物实验培养基的配制和灭菌的思考题！急！
1.棉花起到过滤、透气的作用啊！并且棉花的开头大小是可以尽可能改变的，而不需要非得找到合适的软木或橡皮塞！
2.高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌更彻底！
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