[苯酚与甲醛是如何反应生酚醛树脂的]在酸性条件下加成的话 首先是H+进攻甲醛生成羟甲基正离子，羟甲基正离子比甲醛的亲电性更强，容易与苯酚发生亲电取代反应生成邻或对位羟甲基酚 在碱性条件的话类似的，苯酚首先变...+阅读

苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，①为土壤样品。下列相关叙述错误的是A.图中②培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源B.如果要测定②中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C.若图中④为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一碳源D.使用平板划线法可以在⑥上获得单菌落查看解析答案C 解析试题分析： 培养能降解苯酚的微生物，培养基中应以苯酚作为唯一碳源，A正确。稀释涂布平板法可用来测定活细菌数量，B正确。对照实验④应用正常的培养基进行对照，C错误。平板划线法可在培养基表面形成单个菌落，D正确。

考点： 本题考查微生物培养相关知识，考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力及从图形中提取信息的能力。...

如何提取芦荟RNA最好是苯酚法

动植物组织mRNA提取：

一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。

二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。

三、试剂

1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。

2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。

3、1*层析柱加样缓冲液；20mmol/L Tris·Cl(pH7.6),0.5mol/L NaCl,1mmol/L EDTA(pH8.0),0.1% SDS。

4、洗脱缓冲液：10mmol/L Tris·Cl (pH7.6),1mmol/L EDTA (pH8.0),0.05% SDS。

四、操作步骤

（一）动植物总RNA提取-Trizol法 Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。

1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。

2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。

3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。

4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。

5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意]

1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。

2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。

（二）mRNA提取 由于mRNA末端含有多poly(A)+，当总RNA流径oligo(dT)纤维素时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异的吸附在oligo(dT)纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT) 纤维素柱，可得到较纯的mRNA。

1、用0.1mol/L NaOH悬浮0.5-1.0g oligo(dT)纤维素。

2、将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱中或装入填有经DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5-1.0ml，用3倍柱床体积的灭菌水冲洗柱床。

3、用1x柱层析加样缓冲液冲洗柱床，直到流出液的pH值小于8.0。

4、将

（一）中提取的RNA液于65℃温育5分钟后迅速冷却至室温，加入等体积2x柱层析缓冲液，上样，立即用灭菌试管收集洗出液，当所有RNA溶液进入柱床后，加入1倍柱床体积的1x层析柱加样溶液。

5、测定每一管的OD260，当洗出液中OD为0时，加入2-3倍柱床体积的灭菌洗脱缓冲液，以1/3至1/2柱床体积分管收集洗脱液。

6、测定OD260，合并含有RNA的洗脱组分。

7、加入1/10体积的3M NaAc(pH5.2), 2.5倍体积的冰冷乙醇， 混匀， -20℃30分钟。

8、4℃下12000g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗 涤沉淀，4℃下12000g离心5分钟。

9、小心弃去上清液，沉淀空气干燥10分钟，或真空干燥10分钟。

10、用少量水溶解RNA液，即可用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并贮存于-70℃）。 [注意]

1、mRNA在70%乙醇中-70℃可保存一年以上。

2、oligo(dT)纤维素柱用后可用0.3mol/l NaOH洗净，然后用层析柱加样缓冲液平衡，并加入0.02%叠氮钠（NaN3）冰箱保存，重复使用。每次用前需用NaOH水层析柱加样缓冲液依次淋洗柱床。 兔肝RNA的制备： 实验目的 1.学习从兔肝中提取RNA的方法。 2.通过地衣酚显色法测定RNA的含量。 实验原理 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合小规模生产。 动物组织中以肝脏器官RNA含量较为丰富。经组织匀浆用苯酚处理并离心后RNA溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层中加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA；其工艺简单，所提取的核酸均为变性RNA，只能用作制备核苷酸原料。本实验就是将兔肝组织，在酚与十二烷基硫酸钠的存在下，RNA与蛋白质分离使蛋白质变性凝固。RNA溶解在水相中，用乙醇使RNA从水相中沉淀，达到分离。 RNA含量的测定，除了可用紫外吸收法及定磷法外，常用地衣酚法测定，其反应原理是当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3, 5-二羟甲苯（地衣酚orcinol）反应，在Fe3+或Cu2+催化下，生成鲜绿色的复合物.反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20-250微...

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