[基于FPGA的序列信号发生器的设计]没邮箱吗，几种常用的波形发生VHDL码如下：正弦波函数发生模块：LIBRARY IEEE；——加载库文件USE IEEE.STD_LOGIC_1164.ALL;USE IEEE.STD_LOGIC_UNSIGNED.ALL;USE IEEE.STD_LOGIC_A...+阅读
疯了………………你这个是要实验用还是要交作业啊…………
引物设计首先需要找到你要P出来的序列。让我们假设这一段就是你要P的东西………………
第二步就是在该序列或者附近直接用原序列做引物。你这个为例的话，5'就是TCGATG，而3'就是TAGGCT。注意5'就是原序列而3'则是互补序列。还需要注意的是，两个primer都是5'-3'的写法。
第三步则应该是在全序列中寻找这两个引物是否会出现错配，以及错配的严重情况。错配严重的在PCR之后会出现较小的杂带。
还有就是引物自身会不会出现发夹（就是引物自己的局部会发生错配），两条引物会不会形成互配等等（这些都是不存在为最好的）。这两个会影响PCR产物的量，严重的会没有产物形成。
因为是做PCR的，还需要检查两条引物的TM（变性解聚需要的最低温度）值是否接近（接近为好）。
真正设计引物的时候经常还需要考虑加入酶切位点，这样的话，酶切位点因为是回文结构，错配就会无法避免，不用考虑了。
基本上设计引物的要点就是这些了。有什么不懂的你再补充。
回答补充：
至少我老师给我讲引物设计的时候，没有说过开头能否使用CG之类的东西……
关于引物中GC的问题，一般说其含量在40~60%左右时，P的效果最好。但是也有人用实验证明小于或大于这个范围同样可以做的很好。
上次还忘记说了，引物设计中比较关键的是3'端。那里的序列是不能动的，因为P的时候就是3'端的紧密结合开始的。相对的，如果要做任何改动，可以考虑5'端，但也最好不要直接从头开始改。留下几个碱基作为保护碱基可以提高引物的效果。
已知动物PRL基因序列如何设计引物本站
2，上游引物设计：选取正向5'-3'的基因序列约23bp左右，copy下来；在这段序列的5'端加上你的上游酶切位点（一般6bp），再在之前加入两个任意碱基作为保护碱基；序列为：保护碱基（2bp）+上游酶切位点（6bp）+基因起始序列5'-3'，引物碱基总长约28-30bp.
3，下游引物设计：将序列反相互补，得到互补链序列，选取5'-3'的基因序列约20bp左右，同样在5'端加上下游酶切位点和保护碱基；一般情况下还需要在酶切位点和基因之间加上stop codon。序列为：保护碱基（2bp）+下游酶切位点（6bp）+stop codon(3bp)+基因互补序列起始序列5'-3'，引物碱基总长约28-30bp
4，检查：（1）引物长度；（2）上游酶切位点是否移码，如果移码，则应增加1-2个碱基恢复读码框；（3）如果下游没有设计终止密码子，也应检测是否移码，PCR能否顺利终止，不行则休正；（4）退火温度，一对引物的退火温度不能相差太大，否则应调节碱基使之满足要求。
怎么设计引物
PCR引物又称为寡核苷酸引物，也就是RNA，是由人工合成的，PCR引物通常是一对，引物1和引物2。由于DNA聚合酶只能从核苷酸链的5'端到3'端进行复制，也就是只能识别3'的尾端，而且只能把核苷酸连到已经和DNA模板互补产生的多核苷酸链上，所以引物1和2分别于双链DNA的两条链的尾部（就是末尾是3'端的那一边）结合，为那些脱氧核苷酸提供3'的末端，就相当于开了个头。然后在DNA聚合酶的作用下合成两条新链。而那段引物就成了新链的一部分。 其实在生物体内的DNA复制也是这样的一个过程，只是引物是人体自身合成的 引物设计原则 * 序列选取应在基因的保守区段 * 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构 * 典型的引物18到24个核苷长。
引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。 * Tm值在55-65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%-60% * 引物之间的TM相差避免超过2℃ * 引物的3'端避免使用碱基A，引物的3'端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基 * 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。 * Taqman探针技术要求片段长度在50bp-150bp * 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。
以下为关联文档：
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