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一、可以使用oligo 6 或者primer5 等软件设计。用这些软件选择引物，主要就是看引物的稳定性，形成二聚体的可能性，退火温度等等参数。

二、如果你的序列同源性不高，GC含量也还可以的话，可以使用一些经验性原则。比如 1. 寡核苷酸链退火温度用经验公式2x(A+T)+4x(G+C)，一般用58度。不一定非是58 度，但用58度往往可以找到比较合适的序列。

2. 长度在18-21bases左右。 3. C、G含量40%-60%，分布比较均匀。 4. 3'端最后一个碱基最好是G或C，末尾不要有连续的GC。 5. 两条引物不会形成二聚体。 6. 单个引物不形成发夹结构。等等 这些原则在分子生物学书上有详细的介绍。

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