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平板划线法分离菌种实验步骤

1、融化培养基

将装有伊红美蓝琼脂培养基的三角瓶放入热水浴中加热至沸，直至充分融化。

2、倒平板

待培养基冷却至50℃左右后，按无菌操作法倒平板（每皿约倒15ml），平置，待凝。

操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一条稍大于瓶口的缝隙，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。

3、作分区标志（操作熟练后此步骤可省略） 在皿底用记号划分成4个不同面积的区域，使A4、划线操作 1）挑取菌样：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌试样。 2）先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线当作初步稀释的菌源。烧去接种环上的残余菌样。 3）划其余区：将烧去残菌后的接种环在平板培养基边缘冷却一下，并使B区转至划线位置，把接种环通过A区（菌源区）而移至B区，随即在B区轻巧地划上6~7条致密的平行线，接着再以同样的操作在C区和D区划上更多的平行线，并使D区的线条与A区平行（但不能与A区或B区的线条接触！），最后，将左手所持皿底放回皿盖中。烧去接种环上的残菌。 5、恒温培养 将划线后的平板至37℃倒置培养2~3天。 6、挑单菌落 良好的结果应在C区出现部分单菌落，而在D区出现较多独立分布的单菌落。然后从典型的单菌落中挑取少量菌体至试管斜面，经培养后即为初步分离的纯种。 7、清洗培养皿 将废弃的带菌平板作煮沸杀菌后进行清洗、晾干。

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