[未成熟主体更需要引导进行道德学习]理解是个体道德发生的基础，而未成熟主体发展的特点则是：完整，但不完善。也就是他的主体性和思维等都是完整地存在，但是不完善——他认识与对待客体是先表面、后内部；先...+阅读
未成熟DC和肿瘤细胞共培养后，怎样测DC表面标志【培养原理】1.DC培养用细胞因子：nGM-CSF（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）：GM-CSF是一种造血生长因子，在体外可刺激中性粒细胞和巨噬细胞的集落形成，并具有促进早期红巨核细胞、嗜酸性祖细胞增殖和发育的功能。GM-CSF是最早被鉴定出来对于DC有作用的细胞因子之一。GM-CSF在DC培养中的功能是促进单核细胞向大巨噬样细胞分化，细胞表面MHC II类分子的表达得以提高，从而增强细胞的抗原递呈功能。
此外，GM-CSF还可促进DC的存活。nIL-4 （白细胞介素-4）IL-4在由单核细胞诱导成DC的过程中发挥的作用是抑制巨噬细胞的过度生长，从而引导单核细胞向DC方向分化。若培养体系中不加IL-4，单核细胞将分化为巨噬细胞。同时，IL-4还有降低细胞表面表达CD14分子的能力。CD14表达水平的降低是单核细胞分化为DC的重要标志。GM-CSF和IL-4共同作用可使单核细胞定向分化为未成熟DC(immature DC)，此时的DC具有较强的抗原摄取和加工能力，但抗原递呈能力很弱。
细胞表面中度表达MHC I类、II类分子和B7家族分子（CD80, CD86等），但不表达CD14。nTNF-a （肿瘤坏死因子-a）TNF-a可下调未成熟DC的巨胞饮作用和表面Fc受体的表达，使细胞内MHC II类分子区室（class II compartment）消失，但能够上调细胞表面MHC I类、II类分子和B7家族分子（CD80, CD86等）的表达，使未成熟DC分化为成熟DC(mature DC)，此时DC的抗原摄取和加工能力明显减弱，而抗原递呈能力显著增强，可极强的激活T细胞。
2.CIK培养用细胞因子和抗体：nCD3激发型单抗：T细胞活化的第一信号来自于T细胞表面的受体，即T细胞抗原受体（T cell antigen receptor, TCR）与APC提呈的抗原的特异性结合，也就是T细胞对抗原的特异性识别。TCR是由2条不同肽链构成的异二聚体，在T细胞表面，其与CD3分子通过非共价键结合，形成TCR/CD3复合体。TCR识别特异性抗原后会引起CD3和T细胞表面的辅助受体CD4或CD8分子的胞浆尾部聚集，进而激活与胞浆尾部相连的酪氨酸激酶（Lck, Fyn和ZAP-70等），促使CD3分子胞浆区的免疫受体酪氨酸活化基序（immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM）中的酪氨酸（Y）磷酸化。
磷酸化的酪氨酸（pY）进一步磷酸化下游含酪氨酸的蛋白，从而引起激酶活化的级联反应（磷脂酰肌醇途径或MAP激酶途径等），最终通过激活转录因子，使其进入细胞核内，结合于调控T细胞增殖和活化的靶基因（如IL-2和IFN-g等），引起基因的表达和转录，T细胞因而由静止状态转为增殖和活化状态。由上可见，CD3分子在T细胞活化信号的转导中起着极其关键的作用。
CD3激发型单抗与T细胞表面CD3分子特异性结合后，可引起CD3分子胞浆区ITAM基序中酪氨酸的磷酸化，进而导致T细胞增殖和活化的下游信号的激活，从而使T细胞增殖和活化。也就是说，CD3激发型单抗能够模拟抗原与TCR/CD3复合物的识别和激活过程，从而引起T细胞的增殖与活化，因此是CIK细胞培养中不可或缺的刺激因素。此外，CD3激发型单抗在选用时一定要注意克隆号。
研究表明，仅克隆号为OKT-3的CD3激发型单抗可以刺激所有人的T细胞的增殖，而其它克隆号的CD3激发型单抗仅能刺激一部分人的T细胞。因此，在进行CIK培养时，最好选用OKT-3克隆，以保证每个患者的T细胞均能被激活。nIL-2 （白细胞介素-2）IL-2最初发现时被称为T细胞生长因子（T cell growth factor, TCGF），是引起T细胞增殖最重要的细胞因子。IL-2既是自分泌细胞因子，也是旁分泌细胞因子，其通过与T细胞表面的IL-2受体（IL-2R）的特异性结合而促使T细胞活化，并进入细胞分裂状态。
此外，IL-2还可刺激NK细胞的生长并增强其杀伤能力。因此CIK细胞培养中须添加IL-2，以促进T细胞的增殖与活化。nIFN-g （干扰素-g）IFN-g 具有上调外周血淋巴细胞表面IL-2R表达的作用，因此会增强T细胞对IL-2促增殖反应的敏感度和强度。在诱导CIK细胞形成的过程中加入IFN- g ，可降低IL-2的用量。研究发现，IFN-g加入的顺序与CIK的细胞毒活性密切相关。
先加入IFN- g，培养24后再加入IL-2，可明显提高CIK的细胞毒活性。nIL-1a（白细胞介素-1a）IL-1a也可以介导外周血淋巴细胞表面上调表达IL-2R。当IL-1a与IFN-g和激发型CD3单抗合用时，可以明显提高CIK 的细胞毒作用。【细胞制备】1.外周血单个核细胞的采集1.1用血细胞分离机采集患者自身的外周血单个核细胞80 - 100ml;1.2淋巴细胞分离液密度梯度离心法进一步纯化单个核细胞（PBMC）。
1.3无血清培养液洗涤2次，获得纯度在90%以上的PBMC，细胞数量需达到 1-3 x 108。2.（可选步骤） 肿瘤抗原的制备用于负载DC的肿瘤抗原可以是肿瘤特异性抗原肽（Tumor-Specific Antigens, TSA）或肿瘤相关抗原（Tumor-Associated Antigens, TAA），也可以是肿瘤全细胞抗原。用TSA或TAA负载的DC具有很好的靶向性，但该方法具有已确定的肿瘤特异性抗原或抗原肽种类少和单一抗原的免疫攻击经常无法杀伤肿瘤细胞等缺陷。
而用肿瘤全细胞抗原负载DC可克服...
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