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上皮细胞培养应该注意什么

05月15日 编辑 39baobao.com

[培养孩子的注意力,究竟应该注意哪些小细节]上周末,梦老师带着宝宝去朋友家里玩耍。一进门,就看到朋友家三岁的娃娃对着自己一地的玩具不知该如何玩起。 我问朋友,为何要一次性给孩子拿出那么多玩具呢?朋友很是无奈的告诉...+阅读

上皮细胞培养 1)表皮细胞培养 1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1 平方厘米小块。 2.EDTA 处理:先置入0.02%EDTA 中室温置5 分钟。 3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。 4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。 5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60 分钟。 6.用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。 7.培养液:通过80 目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2 温箱培养。 2) 乳腺组织培养 直接培养法:(适于培养含纤维少的软组织) 1.在含有少量培养液或Hanks 液的容器中,用锋利刀片将组织反复切割成碎块。

2.把组织碎块连同液体注入离心管中,再补加少许培养液,用吸管吹打片刻,置试管架3~5 分钟。吸除上层液可排除非乳腺细胞部分。重复2~3 次。 3.末次处理结束后,向沉降管中再补加培养液,用吸管稍吹打,使沉降物重悬。不待细胞团块下降立即通过3~4 层无菌纱布滤入另管中。 4.调整好适宜密度,接种入培养瓶中培养。 胶原酶消化法:(适于处理含纤维多的较硬组织) 其过程与培养其它组织相同。 3) 胃上皮细胞培养 1.取材:取胃溃疡或胃癌手术切除胃标本远端非病变区粘膜少许。 2.清洗:用含庆大霉素(400 微克/毫升)和二性霉素(2 微克/毫升的Hanks)液漂洗后,用钝器剥离下粘膜,剪成1mm3 大小。 3.消化:在I 型胶原酶和透明质酸酶中,于37℃中消化80 分钟。 4.离心:收集细胞悬液,800 转/分离心后,Hanks 液漂洗两次。

5.接种:末次离心后加入含有1%~2%胎牛血清的完全培养基,接种入不同孔数的培养板中,接种量依不同实验目的而定。 4) 肝细胞培养 初代组织块培养: 取新鲜肝脏,先剥除被膜和血管等纤维成分,用刀或剪刀把肝脏剪成1mm3 左右的小块,采用帖壁培养法。 初代消化法培养: 1.把肝组织切成2~4 立方毫米的小块,用不含钙镁的BSS 液洗两次。 2.移入1:1 的0.1%胰蛋白酶和0.1%胶原酶(都用无钙镁BSS 配置)中,4℃冷消化10~12 小时后,通过250 微米和64 微米尼龙网或不锈钢纱网滤过。 3.收集细胞、BSS 液洗1~2 次、计数、接种培养。 消化培养肝细胞的另一种方法是灌流法(肝脏灌流需用全肝,以较小动物如小鼠和大鼠为好): 1.无菌解剖动物,取出肝脏,先用BSS 洗除血污。 2.取5ml 注射器一支,吸取消化液后,把注射器头轻轻插入肝管中,用线绳结扎牢固,以防消化液漏出,轻轻把消化液注入肝管系统,并不时轻揉压肝脏,以便消化液进入肝小叶中;消化液在肝内停留20~30 分后,在吸出消化液的同时并轻揉压肝脏,以使肝细胞脱落和消化液吸出。

3.待吸净消化液后,注入离心管中,低速离心分离,用RPMI 1640 培养基培养(较其它培养基为好),能获得较纯的肝上皮细胞和获较好的效果。 传代培养: 待细胞生长连接成片后,用BSS 洗一二次,加1:1 的0.025%胰蛋白酶和0.02% EDTA 混合消化3~5 分钟,待细胞回缩,便停止消化,弃掉消化液,用BSS洗一二次,注入营养液,吹打,制成细胞悬液,再接种培养。 5)内皮细胞培养 1.取产后的新鲜脐带。如不立即培养可以保存于4℃中,但不宜超过12 小时。无菌剪取长10~15 厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管,亦可用于培养。 2.先用三通注射器吸温PBS 液注入脐带的静脉中,洗除残血,注入口处宜用线绳结扎,以防液体返流。 3.用血管钳夹紧脐带一端,从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1%的胶原酶,待末端出现液体后结扎之,令充满血管,注入口亦应结扎,以防液体返流,消化3~10 分钟。

4.吸出含有内皮细胞的消化液,注入离心管中,为获取更多细胞,可再注入温PBS 冲洗2~3 次彻底清除干净残余细胞,一并注入离心管中离心。 5.吸除上清,加1640 培养液,制成细胞悬液,接种入瓶皿中培养,顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。 6)毛细血管内皮细胞培养 肿瘤条件培养基制备: 1.取C3H 小鼠的S-180 实体肉瘤组织。 2.胰蛋白酶消化,Dulbecco 改良Eagle 氏培养液15ml(含10%小牛血清),接种到T-75 Falcon 产培养瓶中培养。 3.在细胞生长接近完全汇合时,收集培养液制成条件培养基;再用含10%小牛血清的新培养液后,也每隔两天收集一次,可获得多量条件培养基。 4.4000 转/分离心后,再通过0.22μm 微孔滤膜滤过,-20℃冻存备用(临用前融解)。 初代培养: 1.取材:取新鲜牛肾上腺数个,先用Hanks 液洗除血污。

2.剥除被膜,分离出皮质,切成1 立方毫米小块,加0.5%胶原酶室温中消化1 小时,每隔10 分钟用吸管吹打悬液令消化充分。 3.通过不锈钢纱网滤过,网眼要求只允许能通过小于110 微米长的毛细血管小段。 4.650rpm,4℃,离心7 分钟后,弃掉上清胶原酶。 5.沉淀物用培养液重悬并离心,再重悬,再离心,共两次。 6.末次沉淀物仍用含有10%小牛血清的Dulbecco 改良Eagle 氏培养液重悬后,稍吹打。 7.接种于铺有明胶底层的培养皿中,37℃培养,在培养头1~3 小时中,毛细血管小段...

怎样才能让厌学的儿童提高学习兴趣

孩子学习注意力不集中,的确让家长伤脑筋。要是孩子天生愚笨,根本就不是读书的料,家长们也许心理还比较坦然。可孩子明明挺聪明的,许多高难度的习题都能做出来,可就是不能集中心思在学习上。因此,有些家长甚至感到绝望,颇有些“恨铁不成钢”的意味。我也常听到一些家长这样抱怨孩子写作业时心不在焉的情形,老师经常说学生在课堂上注意力不集中,净开小差。。。。。。可见,孩子学习注意力不集中,的确让家长伤脑筋。如何改孩子学习时注意力分散的坏习惯呢?湖南春雷青少年特训学校校长胡奇辉说了他的几点意见。 1,家长陪孩子读书不可提倡。正如一位权威人士所说:“有的孩子学习拖拉是因为没有养成良好的学习习惯,更多的则是由于父母过分关注他们做作业,甚至包办代笔。”事实上,大多数儿童教育专家都不赞成家长陪孩子读书,因为家长总会情不自禁地敦促孩子不要这样做,而要那样做。这些时断时续的语言刺激,更易于分散孩子的注意力。同时,也会让孩子对家长产生强烈的依赖性。 2,发现孩子注意力不集中的症侯。比如,有的孩子注意力不集中是因为患有“多动症”,这就需要看心理医生。注意力不集中有如下症侯:经常无缘无故就烦躁不安,好像对什么都不太感兴趣;对任何一种东西都无法保持较长时间的专注;在课堂上,眼神游戈,自己都不知道自己在想些什么。 3,给孩子一个明确的完成作业的期限。比如可以这样对孩子说:你可以不着急,但你必须在8点钟之前完成作业,不然,周末就不能做什么等。培养孩子的时间紧迫感,慢慢地让孩子形成学习规律。有了明确的任务,孩子学习时就有了动力,才能保持紧张状态。当然,要求孩子学习时,时间不能太长,也不能要求孩子长时间做同一件事。因为这些都是导致孩子注意力不集中的因素。 4,给孩子适当的奖励。比如,当孩子按时完成作业,家长不但要从言语上加以表扬,还可以辅助一些别的奖励。同时,还可以为孩子设定一个假想的竞争对手,提醒他“谁每天晚上只需花一个小时就能完成作业,还有时间看动画片什么的”。 5,为孩子营造一种良好的学习环境。许多孩子注意力不集中,主要与家庭环境有关。有的家长白天上班很累,晚上就喜欢看电视,而且声音很大,还有的家长喜欢把邻居、同事约在家里打麻将,这必然会影响孩子的注意力。当孩子学习时,家长一定要保持安静。不要让孩子注意到家长在做什么。如果家长一直保持着良好的读书、学习的习惯,孩子就能耳濡目染。此外,要注意排除干扰孩子学习的因素。 6,适时解除孩子内心的忧郁。当孩子心理压力比较重的时候,孩子的注意力就无法集中。许多孩子害怕考试,尤其是害怕一些家长们告诫为“将决定一生命运”的考试。为此,孩子们经常心神不安,甚至胡思乱想。背负沉重的心理负担,孩子自然就无法专心学习。因此,但凡优秀的家长,都是孩子称职的心理安慰师。 7,主要培养孩子的责任感。家长应该让孩子明白,学习是孩子自个儿的事,用心学习,是对自己将来负责。通过刻苦学习,掌握了各种技能,是将来在社会上立足的资本。一个对自己都不负责的孩子,将来是不可能关心、爱护他人,更不用说能做出一番大事业来。 8,发掘孩子的学习兴趣。如果一个学生那门功课毫无兴趣,那就很难要求他集中注意力。假如孩子对学习的内容兴致勃勃,根本不用谁督促就能全神贯注。兴趣是最好的老师,是获取成功的重要条件。 9,孩子学习的速度和难度要适中。在每一个年龄段,孩子接受的新知识都有一定的量。当要求孩子的学习速度太快时,孩子肯定会囫囵吞枣。如果速度太慢,孩子的思维就容易懈怠,从而造成开小差、走神。与此同时,如果孩子学习的内容太难,孩子无法真正理解透,学起来就没什么兴趣可言,开小差在所难免。相反,如果孩子学习的内容太简单,孩子就会感到索然无味,也会造成注意力不集中。 10,注意孩子的身体状况,千万不能让孩子疲劳作战。疲劳、疾病、饥饿和困倦,往往让成人都会感到精力涣散,力不从心。当孩子身心疲惫时,家长还要求孩子咬牙坚持,学习效果自然就会大打折扣,注意力肯定无法集中。要改变孩子的厌学情绪,首先要弄清产生厌学情绪的原因,然后才能对症下药,让孩子快乐学习。孩子产生厌学情绪的原因主要有:

一、家长对孩子学习的目的定向有偏差,将学习知识的目的定在将来而不是今天。比如家长常对孩子说:“你不好好学习,将来就找不到工作。”这样,孩子就体验不到获取知识本身的快乐,而只注重别人对自己的评价。对知识本身不感兴趣,自然将学习看作是苦差。

二、父母陪读,使孩子缺乏学习自觉性。这会使孩子难以领悟学习的过程,难以独立地解决遇到的新问题,体验不到独立解决问题后的成功的快乐。

三、父母的期望值过高。期望过高,会使孩子心理压力大大增加,不自觉地把学习与痛苦体验联系起来。

四、孩子不会学习。这类孩子往往学习时不集中注意力,不能把新旧知识联系起来进行学习;不能选择重要内容而抛开不重要的内容;无法将学到的知识正确、合理地表达出来。这样,面对日益繁重的课业内容,...

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