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李氏杆菌病实验室检验程序是怎样的

01月19日 编辑 39baobao.com

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李氏杆菌病实验室检验程序如下: 1。直接镜检李氏杆菌为革兰氏阳性的小的类球形杆 菌,体积0。4~0。5微米xO。5 ~2。0微米,两端钝圆。在有些 培养基中稍弯曲,单个呈V型或成对平行排列,或几个丛集 一处。在固体培养基上能产生菌丝,长达10 ~ 15微米,单个 或短链,无芽胞,无荚膜。 在20 ~ 251培养时以4根鞭毛运 动,在37时只有较少鞭毛或1根鞭毛,运动缓慢或不运动。 本菌经48小时培养后培养物可以染成革兰氏阴性,常显两极 染色。 2。分离培养本菌为需氧兼性厌氧菌,在普通培养基上 均能生长,但在肝浸液或肝浸液琼脂以及含葡萄糖、血液的培养基中发育更为丰盛。 因此对新鲜病料可直接培养在普通琼 脂培养基、肝浸液葡萄糖琼脂培养基、肉汤和肝片肉汤培养基 上进行分离或增菌培养。若病料被杂菌污染时,可应用血液 亚碲酸钾培养基: 普通琼脂 100毫升 脱纤维兔血 10毫升 2%亚碲酸钾 1毫升 制法:先将普通琼脂加热溶化并冷却至50℃左右,再加 人灭菌的2%亚碲酸钾1毫升和脱纤维兔血10毫升,混合后 倒人平皿内制成平板。

(1)普通琼脂培养基在琼脂平板上培养24 ~ 48小时 后,呈中等大小的菌落,直径约为1 ~2毫米,菌落呈圆形,表 面光滑,边缘整齐,透明似水滴样。培养较久则菌落增大而透 明度减低。在琼脂斜面上培养,一般72小时后开始发育,在 斜面的基部或边缘生长。 透光检查时呈淡蓝色或浅灰色,反 射光检查时呈乳白色。

(2)血液琼脂在血液琼脂上生长良好,菌落细小、圆 形、光滑而有狭窄的(3 -溶血环,但因血的种类不同而略有差 异。有少数菌株强烈溶血,少数菌株不溶血。

(3)普通肉汤在普通肉汤培养基中培养24小时后,肉 汤呈均匀混浊生长,有少量黄色颗粒状沉淀,震荡试管时呈发 辫状浮起,有较薄的菌膜形成。

(4)肝浸液葡萄糖琼脂在琼脂平板上培养形成圆形、 光滑、稍扁平、奶油状菌落。用透过光线观察是透明的,而用 反射光观察呈乳白色。可区分为光滑型、中间型和粗糙型菌 落。在斜面上培养,菌落汇聚生长,呈扁平、透明、奶油状。

(5)蛋白胨琼脂菌落比肝浸液琼脂长势稀薄,其他相 似。

(6)肝片肉汤培养24 ~48小时后,生长情况较普通肉 汤混浊。

(7)血液亚碲酸钾培养基菌落形成黑色,有明显的(3- 型溶血环。

(8)在含有6。 5%的氯化钠或含水量为40%的胆汁培养 基中亦能良好生长。

(9)在含有0。25%的琼脂、8%的明胶和1%的葡萄糖半 固体培养基中,于371培养24小时后,生长物沿穿刺线以不 规则的云雾状延伸到培养基内,缓慢地扩展到整个培养基。 生长达到最高量时,在培养基表面下3 ~5毫米处形成一伞状 的界面,形如倒杉树状。 3。生化反应试验李氏杆菌能发酵葡萄糖、果糖、鼠李 糖、水杨苷和麦芽糖,产酸不产气。能缓慢发酵蔗糖、乳糖、木 糖和糊精,不规则产酸。不发酵阿拉伯糖、棉实糖、甘露糖、卫 矛醇、肌醇、山梨醇、侧金盏醇、肝糖和淀粉。 不还原硝酸盐,不形成靛基质,不产生硫化氢,不液化明 胶,不分解尿素,不能利用枸橼酸盐和丙二酸盐。氧化酶试验 阴性,接触酶试验阳性,甲基红试验和维培二氏试验均为阳 性。P -半乳糖苷酶试验阳性,赖氨酸脱羧酶试验阳性。 石蕊牛乳在24小时内褪色,形成少量酸,但不凝固。 4。动物试验

(1)眼结膜试验将分离菌的18小时肉汤培养物滴人 或用棉拭子擦于家兔及豚鼠的结膜囊内,如病料中含有李氏 杆菌时,大约48小时以后出现水肿、混浊、有渗出物;大约在72小时后发生脓性结膜炎和角膜炎,于8 ~ 10天达到高峰后 痊愈。 试验动物发病过程中,进行李氏杆菌的涂片和培养检 査均呈阳性。痊愈后能产生免疫力,再次眼接种无任何反应。

(2)家兔试验将检验病料悬液注射到家兔的静脉或腹 腔内,会引起家兔血液内的单核白细胞非常显著地增加,大剂 量接种家兔在2〜7天内死亡。肝、脾等器官出现灶状坏死或 肉芽,脑组织出现脑炎,腹腔接种出现纤维素性腹膜炎。 小剂 量接种,则出现体温升高等暂时症状。

(3)小白鼠试验将在20 ~25培养18小时的肉汤培 养物给小白鼠腹腔注射0。 1毫升,小白鼠常在接种后2 ~5天 死亡,剖检见肝、脾等脏器发生多数坏死灶。取心血和腹腔拭 子进行镜检和培养均为阳性。 5。病理组织学检査李氏杆菌病在进行病理组织学检 查时,表现为脑膜、脑桥、延脑的单核细胞浸润(细胞套)。在 脑的其他部位,可见大量单核浸润并伴有嗜中性白细胞浸润 的坏死灶病灶。循环血液中单核白细胞增多。 6。荧光抗体检验荧光抗体检验法是诊断李氏杆菌病 的一种快速方法,具有较高的特异性。 用于镜检的病理材料 可采用患李氏杆菌病菌血症的新生胎儿组织,用福尔马林固 定后进行石蜡包埋切片。病死牛可直接采取脑组织或脑脊髓 液进行涂片制成标本,荧光抗体染色后观察,组织切片内的抗 原呈球状和双球状。

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