牛病毒性腹泻黏膜病实验室检验程序如下：牛病毒性腹泻黏膜病检疫检验方法有 直接免疫荧光抗体检査、微量血清中和试验。 1。材料准备病毒：本试验使用的病毒株为Oregon C24， 按常规方法在犊牛肾、睾丸（初代或次代）或鼻甲骨细胞上繁 殖，待75%细胞出现典型病变时收毒，冻融2次，测定毒价， 分装于小瓶内低温保存。 细胞：犊牛原代肾细胞、睾丸细胞、鼻甲骨细胞或MDBK 细胞。 细胞培养液：为细胞加人10%犊牛血清；细胞维持液：为 细胞加人2% ~3%犊牛血清；血清稀释液：为细胞中不加血 清。溶液pH为7。 0 ~7。 2，加人青霉素和链霉素，使终浓度为 100国际单位（微克）/毫升。 乙二胺四乙酸钠-胰酶消化液：按9: 1的比例加人 0。 02%乙二胺四乙酸钠和0• 25%胰酶。 24孔平底带盖塑料培养板：新的密封的培养板可直接使 用；重复使用的培养板需经重铬酸钾清洁液浸泡24小时，再依 次用自来水和双蒸水冲洗干净，烘干，紫外线照射1小时备用。 加样器：50 ~ 200微升调节加样器。 2。实验方法

（1）定量测定被检血清、阳性对照血清及阴性对照血 清在试验前应分别于56℃灭活30分钟。在微量细胞培养板上加人稀释液50微升/孔。取被检血清分别加人一至四排第 一孔（每份血清纵向作四排，微量板可横向或纵向使用）。 用 多头加样器（调至50微升）从每排第一孔横向连续倍比稀释 到最后一孔，弃去最后一孔中溶液50微升。 用稀释液将病毒稀释成每毫升含100个半数感染量的工 作液。 用多头加样器于第二至四排各孔中加病毒工作液50微 升，第一排孔中加50微升稀释液作为血清对照，加盖于置 37 ℃、5 %二氧化碳中感作60分钟。 将生长良好的单层细胞用乙二胺四乙酸钠-胰酶消化液 消化分散后用培养液配制含40万/毫升的细胞悬液。 每孔加细胞悬液100微升，加盖于置37℃、5%二氧化碳 中培养6天。从第四天开始观察结果，于第六天最终判定。

（2）定性测定被检血清只做1:5稀释，其他操作同上。 3。结果判定当细胞对照正常，阴性血清孔对照各孔细 胞出现细胞病变，阳性血清对照孔不出现细胞病变，病毒回归 的毒价与原测定的毒价相关必须在±0。 5 log 10以内，本试验 有效。 定量试验：每份血清同一稀释度的4个孔中有2个以上 孔完全被保护而不出现细胞病变时，该稀释度即为该血清的 抗体滴度。 定性试验：被检血清在1: 5稀释度时有2孔以上的细胞 完全被保护，该血清即为阳性。 4。注意事项

（1）被检血清、阳性对照血清及阴性对照血清在实验前 应分别于561灭能30分钟。

（2）如需测定被检血清的抗体效价，只需先将待检血清 作4倍倍比稀释后，再按本法进行测定。