[科学活动中的探索与操作]一年来先后参加了四次平湖市中心组 科学教学 主题式研训活动。每一次活动后，大家围绕科学活动探索性等问题都进行了比较热烈的讨论。确实，科学教学领域中的很多问题，在日常教学...+阅读

培养基的配制与灭菌 1目的 1.1了解并掌握培养基的配制、分装方法 1.2掌握各种实验室灭菌方法及技术。 2原理 培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多，使用的原料也各有差异，但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。另外，培养基还应具有适宜的pH值、一定的缓冲能力、一定的氧化还原电位及合适的渗透压。 琼脂是从石花菜等海藻中提取的胶体物质，是应用最广的凝固剂。加琼脂制成的培养基在98~100℃下融化，于45℃以下凝固。但多次反复融化，其凝固性降低。 任何一种培养基一经制成就应及时彻底灭菌，以备纯培养用。

一般培养基的灭菌采用高压蒸汽灭菌。 3材料 3.1器皿及材料 天平、称量纸、牛角匙、精密pH试纸、量筒、刻度搪瓷杯、试管、三角瓶、漏斗、分装架、移液管及移液管筒、培养皿及培养皿盒、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、剪刀、酒精灯、棉花、线绳、牛皮纸或报纸、纱布、乳胶管、电炉、灭菌锅、干燥箱。 3.2药品试剂 蛋白胨、牛肉膏、NaCl、K2HPO4、琼脂、NaNO3、KCl、MgSO4、FeSO4、蔗糖、麦芽糖、木糖、葡萄糖、半乳糖、乳糖、土豆汁、豆芽计、磷酸铵、5%NaOH溶液、5%HCl溶液。 4流程 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 5.1.2溶解 用量筒取一定量（约占总量的1/2）蒸馏水倒入烧杯中，在放有石棉网的电炉上小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 5.1.3调节pH 根据培养基对pH的要求，用5%NaOH或5%HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 5.1.4溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分（水需预热）。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 5.1.5过滤分装 先将过滤装置安装好（图3-1）。

如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 5.1.6包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 5.1.7灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。

培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面（图3-2），斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 5.1.8倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45~50℃，立刻倒平板。 5.2灭菌方法 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。

5.2.1.高压蒸汽灭菌法 高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15~30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌（图3-4）。 5.2.1.1操作方法和注意事项如下 加水 打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 装料、加盖 灭菌材料放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 排气 打开排气口（也叫放气阀）。

用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。 升压、保压和降压 当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌...

简述制作培养基的过程及高压蒸汽灭菌锅的使用

制作培养基的过程

（一）称量 根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。

（二）溶解 在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，ZHU一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。

（三）调PH 用1mol/L NaOH或1mol/L HCl把PH调至所需范围。

（四）过滤 趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。

（五）分装 按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内，分装装置如实验图8所示；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。

1.液体分装 分装高度以试管高度的1/4左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2为宜。

2.固体分装 分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三解瓶，以不超过容积的1/2为宜。

3.半固体分装 装置以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。

（六）加棉塞 分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。

（七）包扎 棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。

（八）保存 灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24小时，以检验灭菌的效果，无污染方可使用。

高压蒸汽灭菌

1.首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角架相平为宜。

2.放回内层锅，并装入待灭菌物品（内装培养基或小的三角瓶），不要装得太挤，以免妨碍汽流通影响灭菌效果，三角瓶口不要与桶壁接触，以免冷凝水淋温包口的纸而透入棉塞。加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内，再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个棉栓，使螺栓松紧一致，，勿使漏气。

3.用电炉或其他方法加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气，待冷空气排尽后，关上排气阀让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内达到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。

4.停止加热，待压力表的压力降至零位时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。

注意：当压力不为零时，不能开盖取物否则由于压力突然下降，容器内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染而发生污染，甚至灼伤操作者。

5.高压灭菌锅上的安全阀，是保障安全使用的重要机构，不得随意调节。

如何做培养基的配制灭菌验证

培养基干粉是有菌的，配置好后，如果不及时灭菌，细菌就会大量繁殖，消耗营养成分，导致培养基失去原有作用，所以必须及时灭菌。

如果怕高压不充分，培养基灭菌不彻底，可一每次多配置一小份同样的培养基，高压后将该培养基放置培养箱中，如果该小份培养基出现大量菌增殖现象，说明灭菌不充分，反之，则是无菌的。

1、无菌试验

抽取少量培养基做无菌试验，按照卫生消毒规范或药典上的方法操作（简单地说取少量灭菌好的物体分别进行有氧、厌氧、真菌培养，7天后培养液不浑浊并且镜检无菌），灭菌彻底则应该可以通过无菌试验.

2、预培养

将配置好的培养基按其需要培养24-48小时，至少过夜，如果是固体培养基则无任何菌落生长，如果是液体培养基则不浑浊.严格的说配好的培养基都应该做预培养的，而且是全部做，一方面可以把受细菌污染的培养基丢弃以免影响试验，一方面将附着的水气蒸发掉否则可能会干扰试验.

3、灭菌指示剂

分为化学指示剂和生物指示剂.灭菌时将指示剂放入灭菌锅中的不同部位一同灭菌，如果是化学指示剂则其颜色变化符合要求；生物指示剂（嗜热芽胞杆菌）灭菌后进行培养为阴性.

MS培养基的配制与灭菌

植物组织培养中常用的一种培养基是MS培养基。MS培养基的配制包括以下步骤。 培养基母液的配制和保存 MS培养基含有近30种营养成分，为了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量，可将培养基中的各种成分，按原量的20倍或200倍分别称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的1/20(50 mL)或1/200(5 mL)，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需的各类物质的量列出，供配制时使用。 大量元素（母液Ⅰ） mg/L NH4NO3 33 000 KNO3 38 000 CaCl2·2H2O 8 800 MgSO4·7H2O 7 400 KH2PO4 3 400 微量元素（母液Ⅱ） KI 166 H3BO3 1 240 MnSO4·4H2O 4 460 ZnSO4·7H2O 1 720 Na2MoO4·2H2O 50 CuSO4·5H2O 5 CoCl2·6H2O 5 铁盐（母液Ⅲ） FeSO4·7H2O 5 560 Na2-EDTA·2H2O 7 460 有机成分（母液Ⅳ） ⅣA 肌醇 20 000 ⅣB 烟酸 100 盐酸吡哆醇（维生素B6） 100 盐酸硫胺素（维生素B1） 100 甘氨酸 400 以上各种营养成分的用量，除了母液Ⅰ为20倍浓缩液外，其余的均为200倍浓缩液。

上述几种母液都要单独配成1 L的贮备液。其中，母液Ⅰ、母液Ⅱ及母液Ⅳ的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1 L。 母液Ⅲ的配制方法是：将称好的FeSO4·7H2O和Na2-EDTA·2H2O分别放到450 mL蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至55，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。 各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。 MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）、萘乙酸（NAA）、6苄基嘌呤（6BA）等植物生长调节物质，并且分别配成母液（01 mg/mL）。其配制方法是：分别称取这3种物质各10 mg，将2,4-D和NAA用少量（1 mL）无水乙醇预溶，将6BA用少量（1 mL）的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100 mL，即得质量浓度为01 mg/mL的母液。

配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用量：母液Ⅰ为50 mL，母液Ⅱ、Ⅲ、ⅣA和ⅣB各5 mL。再取2,4D 5 mL、NAA 1 mL，与各种母液一起放入烧杯中。 配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。 溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。

然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至1 000 mL，搅拌均匀。 需要注意的是，在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万不能离开，否则沸腾的琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如果没有搪瓷量杯，可用大烧杯代替。但要注意大烧杯底的外表面不能沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。 调pH 用滴管吸取物质的量浓度为1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的pH试纸（54~70）测培养基的pH，一直到培养基的pH为58为止（培养基的pH必须严格控制在58）。 培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时，先将培养基倒入烧杯中，然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶（50 mL或100 mL）中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。

锥形瓶中培养基的量约为锥形瓶容量的1/5~1/4。每1 000 mL培养基，可分装25~30瓶。 培养基分装完毕后，应及时封盖瓶口。用2块硫酸纸（每块大小约为9 cm*9 cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后在锥形瓶外壁贴上标签。 高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一，码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中，再放入高压蒸气灭菌锅内。如果没有金属小筐，可以在两层锥形瓶之间放一块玻璃板隔开。 第二，放置其他需要灭菌的物品。将其他需要灭菌的物品也放入高压蒸气灭菌锅内，如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧杯、广口瓶（以上物品都要用牛皮纸封口），用牛皮纸包裹的培养皿、剪刀、解剖刀、镊子、滤纸、铅笔等。 第三，灭菌。

待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98 kPa、121.3 ℃下，灭菌20 min。 灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。

以下为关联文档：

儿歌与幼儿音乐能力的培养是怎样的充满儿童情趣和具有教育意义的儿歌伴随着幼儿的成长，是幼儿喜爱的精神食粮。它对于培养幼儿的基本音乐能力具有重要意义，因为幼儿音乐能力的培养可以始自儿歌。 儿歌与歌曲有...

我国坚持绿色发展的具体操作方法是什么绿色是永续发展的必要条件和人民对美好生活追求的 重要体现。走向生态文明新时代，建设美丽中国，是实现中 华民族伟大复兴中国梦的重要内容。我国资源约束趋紧，环境污染严重，生态...

我国提高教育质量的具体操作方法是什么全面贯彻党的教育方针，落实立 德树人根本任务，加强社会主义核心价值观教育，培养德智体美全面发展的社会主义建设者和接班人。深化教育改 革，把增强学生社会责任感、创新精神、实...

教育储蓄的具体操作方法是怎样的教育储蓄存期分为一年、三年、六年。教育储蓄50元起存，每户本金最高限额为2万元。开户对象为在校小学四年级（含四年级）以上学生。 a. 一年期、三年期教育储蓄按开户日同期同档...

怎样培养小班幼儿的动手操作方面何提高和培养小班幼儿动手能力 俗说好：心灵手巧我们幼儿园多年来直重视幼儿动手能力培养并且我从教十多年来直小班工作对小班幼儿动手能力培养也颇费心思经过多年工作经验总...

如何培养小班幼儿在区域活动中的动手操作能力初探区域游戏对幼儿动脑动手操作能力的培养 人们常说“心灵手巧”，这说明大脑与手之间有密切的关系。手工活动是操作性强的一项活动，它不仅深得幼儿喜爱，而且是开发幼儿创造潜...

生物细菌是如何培养的要看你要培养哪种微生物，以及培养的用途。 首先选择培养基。比如，比较常见的，培养细菌用肉汤培养基，培养放线菌用高氏一号培养基，培养真菌用马丁氏培养基。具体要看你培养的菌种...

在实验室培养细菌和真菌的一般步骤是 A配制培养基高温灭菌冷培养细菌和真菌的一般方法和实验步骤：（1）配置培养基，首先要配置含有营养物质的培养基，原因细菌的生活需要营养物质，而不是琼脂，琼脂是一种沸腾冷却后能胶化成固体的物质. (2)高温灭...

微生物的实验室培养展开全部 需要控制的主要是营养条件和环境条件 营养条件包括：碳源（速效还是缓效）、氮源（速效还是缓效）、常见的金属离子（如铁、钾、钠、钙、镁等）、微量元素（如钼、钴等）、生长因子等...