[中药药剂学考前辅导浸提与纯化]第二节 纯化一、常用的分离方法与设备常考题型为A、C、X型题。（一）沉降分离法特点：适于固体物含量高的水提液的粗分离，简便易行。但耗时长、药渣沉淀吸附药液多，对料液中固体...+阅读
大孔树脂的预处理
将新大孔树脂于95% 乙醇溶液中浸洗8 h 后, 用蒸馏水清洗至无醇味, 再用5% 氢氧化钠浸泡4 h, 用蒸馏水洗至pH 值中性后, 接着用5% 盐酸浸泡4 h, 再用蒸馏水洗至pH 中性。湿法装柱, 一次完成, 自然沉降。
大孔树脂堆积密度的测定
取一标准玻璃层析柱(26 mm ×500 mm ) 将湿大孔树脂堆至100 mL , 取出, 称重。按下式计算大孔树脂的堆积密度:
Q= m/v
式中 m —— 湿树脂质量, g; v —— 树脂体积,mL ;Q—— 堆积密度, g/mL。
饱和吸附量的测定
称取1. 000 g 湿树脂于锥形瓶中, 加入50 mL 0. 8mg/m L 的罗汉果皂甙水提取物, 封口, 于室温下震荡吸附24 h。分别于吸附前后测定溶液中罗汉果皂甙的浓度, 按下式计算饱和吸附量:
Q 0 = (C0 - C1) ×V/W
式中 Q 0—— 饱和吸附量,mg/g; C0—— 吸附前浓度,mgmL ; C1—— 吸附后浓度,mg/mL ; V —— 溶液体积,mL ; W —— 大孔树脂湿重, g。
罗汉果皂甙静态吸附试验
称取1. 000 g 湿大孔树脂置于锥形瓶中, 加入50mL 0. 8 m gmL 的罗汉果皂甙水提取物, 封口, 每隔20m in 从上清液中取样0. 5 mL , 测定其吸光度, 然后按下式计算吸附量:
Q = (C0 - C1) ×V/W
以吸附量为纵坐标, 作用时间为横坐标绘制静态吸附曲线。
罗汉果皂甙静态解吸试验
称取0. 500 g 湿大孔树脂3 份, 各加入15 mL 0. 8m gmL 的罗汉果皂甙提取物水溶液, 于室温下吸附24h 后, 将充分吸附了罗汉果皂甙水溶液的树脂进行过滤, 去除水液, 再将其置于锥形瓶中, 各加入15mL 95%乙醇溶液, 封口, 分别于20℃, 40℃, 60℃下进行解吸, 每隔3 m in 测定解吸液中罗汉果皂甙的浓度, 并绘制解吸曲线, 同时根据吸附量计算解吸率。
罗汉果皂甙的动态吸附试验
准确吸取20 mL (约17. 93 g)D101 大孔树脂装柱,以浓度为4 m gm L 的罗汉果皂甙水提取物溶液上柱,流速2 mL /m in, 分部收集流出液, 定时测定流出液中的罗汉果皂甙浓度, 然后以洗脱液体积为横坐标, 流出液中罗汉果皂甙含量为纵坐标绘制动态吸附曲线。吸附达到饱和后, 计算饱和动态吸附量。
洗脱剂及其浓度的选择
取一定量的罗汉果皂甙提取物水溶液, 上柱, 先用蒸馏水洗脱至无色后, 依次用50mL 10%～ 80% 浓度的乙醇溶液进行洗脱, 收集不同浓度的乙醇洗脱液并定容至50 mL , 取其中3 mL 洗脱液稀释至10 mL 后测定其罗汉果皂甙的浓度, 以确定的洗脱剂浓度。
上样液最适pH 值的选择
将罗汉果皂甙水提物溶液(pH 值6. 0) 用氢氧化钠溶液调至不同的pH 值, 上柱, 依次用50 mL 同样pH 值的水溶液, 蒸馏水及60% 的乙醇水溶液进行洗脱, 收集60% 的乙醇洗脱液(pH 值6.0) , 定容至50mL , 取3mL洗脱液稀释至10 mL , 测定罗汉果皂甙的浓度, 确定其pH 值。
罗汉果皂甙V , 11-O -罗汉果皂甙V 及罗汉果皂甙IV 的高效液相分析
对照品溶液的配制: 准确称取罗汉果皂甙V , 11-O-罗汉果皂甙V 及罗汉果皂甙IV 对照品0. 005 g, 用23%乙腈水溶液溶解并定容至10 mL , 配制成混合对照品溶液。
样品溶液的配制: 准确称取各样品0. 010 g, 用23%乙腈溶解并定容至10mL , 配制成1. 0m gm L 的样品溶液。
色谱条件: Hypersil ODS C18 柱(250 mm ×4. 6mm , 5μm, 大连伊利特科学仪器公司) ; 流动相: 乙腈:水= 23∶77 (v/v) ; 流速: 0. 5 mL /m in; 柱温: 30℃; 检测波长: 210 nm; 进样量: 10. 0μL。以保留时间定性, 根据峰面积计算样品的含量。
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