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金银花的提取
一、金银花的化学成分 金银花除含有绿原酸和异绿原酸外,还含有环烯醚萜甙裂环马钱素、獐牙菜甙、马钱素、马钱酸、新环烯醚萜甙;常春藤皂甙配基、齐墩果酸;川续断皂甙乙;黄褐毛忍冬甙甲、α-常春藤皂甙、无患子皂甙B、灰毡毛忍冬皂甙甲、灰毡毛忍冬皂甙乙、灰毡毛忍冬次皂甙甲、灰毡毛忍冬次皂甙乙等。挥发油主要含芳樟醇、双花醇、香叶醇、β-苯乙醇、苯甲醇、异双花醇、α-松油醇、丁香油酚等30多种成分。 传统经验及近代药理实验和临床应用都证明,金银花对于多种致病菌有较强的抗菌作用和较好的治疗效果。
二、绿原酸的提取 金银花的主要抗菌有效成绿原酸和异绿原酸。它们是奎宁酸和咖啡酸的酯。中药制剂,制备金银花提取物多采用水提、水提醇沉和稀醇提取。也有用水煎后加石灰乳使绿原酸类成分沉淀,然后加稀酸分解得提取物的方法。提取方法 : 1.稀醇提取法 生药用10倍量和8倍量70%乙醇提取2次,每次2h。提取液过滤,减压浓缩,抽干。 2.水提法 生药用10倍和8倍量水煎煮2次,每次2h,合并提取液,过滤浓缩至干。 3.水提醇沉法 按水提法提取,浓缩至1∶1时,加乙醇至含醇量达75%,静置,过滤,减压浓缩抽干。 4.超滤方法 称取干燥金银花一定量,加入10倍量水沸腾煎煮2次,每次1小时,过滤,挤压药渣,合并药液,离心,量上清液体积。取出1克金银花的药液,以测量原液中绿原酸含量。 将待超滤溶液倒入储液罐,连接超滤器进行超滤。控制一定的压力,至超滤液的体积占原体积的85%左右时,加入相当于原体积15%的水至储液罐中,继续超滤,至超滤液与原体积相同时,取样(为等体积超滤液)待测含量。往储液罐中加入相当于原来体积25%的水,继续超滤,至超滤液相当于加入的水量时,取样(为1.25倍体积超滤液)待测含量。同法继续超滤,得到1.5倍、2倍和3倍体积的超滤液。
三、主要有效成分含量的测定方法 1.紫外分光光度法 (1)如新鲜植物中含有多元酚氧化酶,则先在100℃加热1小时,或浸在1%亚硫酸氢钠溶液中,然后在石英砂中磨碎,用70%乙醇提取3次(总体积≈10倍样品),提取液于40℃-50℃减压浓缩至原体积的1/10,再用纸层析分离。吸取此液0.01毫升点在whatman No.1滤纸上,用丁醇-甲醇-水(4∶1∶5)的水相蒸气饱和过夜(20℃),次日,再用丁醇相下行展开8小时,取出,挥去溶剂后,绿原酸在紫外灯下显暗蓝色荧光,Rf值为0.73,如用氨气熏则变为绿黄色,如喷Hoffners试剂(1%亚硝酸钠的1%甲醇溶液),斑点则变为黄色,如喷1N氢氧化钠溶液则变为红色。
绿原酸的定量则不喷亚硝酸钠溶液及氢氧化钠溶液,可从纸上洗脱,用紫外分光光度计定量。 (2)生药0.5克,用70%乙醇在50℃条件提取(5×10毫升),取提取液0.2毫升点在滤纸上,于暗处用丁醇-醋酸-乙酸丁酯-水(9∶28∶47∶16)层析18小时,在紫外灯下检出绿原酸,用70%乙醇10毫升洗脱,在波长324nm处测吸收度。 (3)纸层析法,用正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶5)在19℃展开26小时而分开,斑点用等量10%醋酸溶液及1%亚硝酸钠溶液喷雾而显色,绿原酸(黄色)的Rf值为0.50。如用氢氧化钠溶液喷雾,绿原酸变为红色。绿原酸的定量是将相应的斑点用异丙醇或甲醇或水洗脱,在波长327nm测量吸收度。 (4)取生药于60℃烘至恒重,称取1克,置于瓶中,加95%乙醇25毫升,在80℃水浴上提取1小时。倾出提取液,再加95%乙醇25毫升,重复提取。合并两次提取液,稀释至一定浓度,在波长324nm处测吸收度,用下面公式计算生药中绿原酸的含量。绿原酸含量%=E×稀释倍数K×样品量(毫克)×100×100% E为吸收度,K为测定常数。用绿原酸纯品测绘标准曲线,按E=KCL的公式(C为标准液浓度,单位为毫克/100毫升,L为比色杯厚度,1厘米),求得常数K为0.479。用此法分析了从各地药材公司收集的金银花样品中绿原酸的含量。 (5)生药粉1克,用70%甲醇提取24小时(室温、暗处)或水浴80℃提取1小时,取部分提取液加于含有2克聚酰胺粉的小柱,用水、稀甲醇溶液洗脱柱子,绿原酸可用0.02%氢氧化钠的70%甲醇溶液洗脱,再用70%甲醇稀释至一定体积,在波长324nm测吸收度,与标准品比较而定量。 2.容量法 (1)碘量法 绿原酸易吸附在wofatit L150上,可从混合物中分离,然后用0.1N盐酸溶液或稀硫酸洗脱,用碘量法滴定,如用3N氢氧化钠溶液洗脱则绿原酸被部分地分解成咖啡酸及奎尼酸,但并不影响结果。 (2)非水滴定 绿原酸在乙腈-甲酸(3∶1)混合液中可被醋酸铜氧化成相应的邻醌(o-quinone),此反应可用于植物样品中酚类化全物的氧化滴定。
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