[星型胶质细胞的纯化培养方法]提供一种星型胶质细胞的纯化培养方法： 1. 分离大鼠胚胎（16-18周）新皮层，置于L-15（或Hank‘s平衡盐/DMEM溶液，无Hepes）培养基中，除去脑膜和血管、海马、尾核和其他非皮层组织。 2. 用...+阅读
轻轻吹打，可先离心（1000rpm. 2，如要高浓度或需更换新培养基，新鲜培养基重悬沉淀，置培养瓶内轻轻摇晃： 1，吸的越干净越好，（根据配制强度经验），镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一，然后收集离心（1000rpm 5min左右），50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后，以免中和后加入的消化液，轻轻振动瓶底使细胞全部脱落.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内，然后继续进行传代、传代培养首先进行细胞复苏，使细胞基本成单个悬浮，然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞细胞培养首先分为原代培养和传代培养、冻存，取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化，晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟，24h后换液.贴壁细胞.6ml，加入完全培养基继续培养、原代培养需要从组织中消化，去除血清和死细胞，轻轻吹匀后.悬浮细胞，加入完全培养基后继续培养或实验： 对于贴壁细胞应先吸（倒）尽培养基，加入2-3ml完全培养基后，适时换液，按此比例进行消化.PBS清洗2-3次，使强度减弱，使细胞均匀后置培养箱内培养： 1,5min左右）后加入完全培养基，完全培养基重悬培养. 2.先将水温锅调至37-38度.应遵守慢冻快融的原则；二、纯化出单细胞、分离. 细胞传代： 一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内，分置其它培养瓶内加入完全培养基继续培养
细胞悬浮培养技术
植物细胞悬浮培养 实验方法
1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织，放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌MS培养基10~15ml，每瓶接种1~1.5g愈伤组织，以保证最初培养物中有足够量的细胞。
2.将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min,25~28℃条件下，进行振荡培养。
3.经6~10天培养后，若细胞明显增殖，可向培养瓶中加新鲜培养基10ml，必要时，可用大口移液管将培养物分装成两瓶，继续培养。（若细胞无明显增殖，可能是起始材料不适当，应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种）。可进行第一次继代培养。
4.县浮培养物的过滤：按“3”法继代培养几代后，培养液中应主要由单细胞和小细胞团（不多于20个细胞）组成。若仍含有效大的细胞团，可用适当孔径的金属网筛过滤，再将过滤后的县浮细胞继续培养。
5.细胞计算。取一定体积的细胞县液，加入2倍体积的8%的三氧化铬（CrO3），置700C水浴处理15min。冷却后，用移液管重复吹打细胞悬液，以使细胞充分分散，混匀后，取一滴县液置入血细胞计数板上计数。
6.制作细胞生长曲线：为了解县浮培养细胞的生长动态，可用以下方法绘制生长曲线图：
(1)鲜重法（fresh weigh method）
在转代培养的不同时间，取一定体积的悬浮细胞培养物，离心收集后，称量细胞的鲜重，以鲜重为纵座标，培养时间为横座标，绘制鲜重增长曲线。
(2)干重法（dry weigh method ）
可在称量鲜重之后，将细胞进行曲烘干，再称量干重。以干重为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制细胞干重生长曲线。
上述两种方法均需每隔2天取样一次，共取7次，每个样品重复三次，整个实验进行期间不再往培养瓶中换入新鲜培养液。
7.细胞活力的检查。对于初学者，往往需要检测活细胞的比率。可在培养的不同阶段，吸取一滴细胞县液，放在载玻片上，滴一滴0。1%的酚藏花红溶液（用培养基配制）染色，在显微镜下观察。几活细胞均不着色，而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色，凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光，有经验的操作者，则可根据细胞形态，胞质环流判别细胞的死活。
8.细胞再生能力的鉴定：为了解悬浮培养细胞是否仍具有再生能力，可将培养细胞转移到琼脂固化的培养基上，使基再形成愈伤组织，进而在分化培养基上，诱导植株的分化。
细胞工程和细胞培养技术是怎样发展起来的
细胞工程的发展历史与应用是指应用细胞生物学、发育生物学、遗传学和分子生物学等方法，通过类似于工程学的步骤，在细胞后细胞器水平上按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质，以获得新的生物物种、品种或特种细胞产品的一门综合性技术。随着科学的发展和人们对生命科学的深入探索，细胞工程技术必将会在工业、农业、环境保护、资源利用等领域发挥越来越重要的作用。细胞工程的理论基础是细胞学说和细胞全能性学说。1839年，Schwann和Schleiden建立了细胞学说，细胞学研究进入快速发展阶段。德国学者Haberlandt(1902年)在发表的《植物细胞立体培养实验》的论文中提出了细胞全能性的观点。Hänning(1904年)进行了幼胚的立体培养，在含有糖、无机盐、氨基酸和植物提取物的培养基上，培养萝卜和辣根菜的幼胚，发现离体幼胚均可充分发育，并且可以提前萌发成苗。
1925年，Laibach培养亚麻种间杂交幼胚获得成功，并得到杂交种。从20世纪20年代起，幼胚培养被用来挽救远缘杂交早期败育的胚胎，因此可以认为，幼胚培养和胚胎拯救（embyrorescue）技术是最早应用的植物细胞工程技术。20世纪30年代，植物组织培养技术基本建立。李继侗（1933年）将3mm以上的银杏胚培养成功，并且发现加入胚乳汁可以促进离体胚的成长。1937年，White发现B族维生素、吲哚乙酸对植物生长具有促进作用。1937~1939年，White、Gautheret和Nobercourt分别建立了植物组织的连续培养物，使离体的植物组织可以在人工培养基上不断生长，从而奠定了现代组织培养的基础。20世纪60年代初，Cocking等人用纤维素酶来分离植物原生质体并获得成功。分离得到的原生质体在培养过程中，可长出新壁，进行分裂和分化，最终形成完整植株。
获得成功的植物有胡萝卜、矮牵牛、油菜、石刁柏等。在动物学界，1907年美国生物学家哈里森用盖玻片悬滴培养蛙胚神经组织，存活数周，而且观察到细胞生长现象，开创了动物细胞培养的先河。德国胚胎学家Spemamm(1938年)认为，早期胚胎细胞具有高度的分化潜能，将胚胎的细胞核移植到去核卵母细胞中，可以发育为新的胚胎。Briggs和Kings(1952年)把非洲豹蛙囊胚的细胞核一到去核的卵母细胞中，得到了非洲豹蛙的胚胎克隆后代，从而证实了Spemamm的观点。Okata(1962年)发现仙台病毒（Sendal virus）可诱发艾氏腹水瘤细胞融合，形成多核细胞，为动物细胞融合技术的发展奠定了基础。诺贝尔医学和生理学奖获得者Cesar Milstein和Geoger Kohler(1975年)将免疫小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞进行融合，获得了既能在体外无限繁殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，有力的促进了免疫学的发展。
细胞工程技术发展迅速，试管植物、试管动物、转基因生物反应器等相继问世。以色列用胚胎干细胞培养出人类心脏组织，可以正常跳动，以及美国培养的造血先驱细胞、中国培养的胃和肠粘膜组织等。1977年英国利用胚胎工程技术成功地培养出世界首例试管婴儿，1997年英国首次克隆出绵羊“多莉”，2001年英国又培育出首批转基因猪。
谁能说明一下三维细胞培养技术
人体内细胞，组织竞相生长，交织成一个非常复杂的，三维的体系，同样，那些对于我们人体产生不良影响的微生物，和传染病病原体也是通过这种复杂的三维环境入侵，并引起疾病的。但是现今的人体细胞培养方法还停留在传统的二维平面上，这种二维培养方法能帮助研究人员建立稳定的体系，越来越观察细胞的行为，和传染病机制，然而随着科学的发展，需求不断加深，二维细胞培养方法已经不能满足科学家们的需要了，我们需要更接近细胞生存环境的培养方法。
近十年，随着组织工程的新兴发展，科学家们提出，并逐渐完善了三维细胞培养技术，这种培养方法获得细胞在基因表达、基质分泌及细胞功能活动等方面与单层培养均有明显差异，而与体内细胞生长情况更为相似，而且三维细胞培养既能保留体内细胞微环境的物质结构基础，又能体现细胞培养的直观性及条件可控制性，把体外无细胞及单层细胞培养体系与组织器官及整体研究联系起来。并且随着一些厂商的参与，这种三维细胞培养技术得以商品化。
著名的自动化生物样品处理公司：Hamilton的BioLevitator? 3D细胞培养仪就是一种先进的3D细胞培养产品，这种细胞培养仪利用磁性微球载体（Global Eukaryotic Microcarrier?,GEM？）和磁悬浮技术，使贴有细胞的微球载体悬浮在培养液中，确保了高质量、高密度的细胞繁殖，突破了传统有盖培养皿、培养瓶或微孔板细胞培养耗时繁琐，细胞产量微小等局限性。
其中GEM？载体是由GlobalCell Solution (GCS)和Hamilton公司联合开发的，由于传统的细胞培养技术必须重复地做细胞繁殖增长、接种工作，以获取所期望的细胞数量，这种局限性降低了药物发现时效性，而新开发的GEM？载体包含的技术是一种有效连续培养、存储和分析应用贴壁细胞新方法，它能将细胞增长、深低温保存、细胞功能分析置于容易操作的载体上。此外，GEM载体可用于储藏并繁殖多种普通且不易做培养的细胞类型，其操作过程简便，类似于试剂方式，由此可解放目前低效率细胞培养分析系统。
除了具备GEM？载体这样的技术以外，BioLevitator? 3D细胞培养仪还能容纳4 个50ml 的细胞培养管进行高密度3D 细胞培养，是一个非常方便的整合细胞培养仪，不需要其他外围设备，所需人工操作极少。
目前BioLevitator? 3D细胞培养仪被广泛地运用于基础生物医学研究（如基因组学、蛋白质组学和细胞组学），新药发现和筛选，临床医学诊断等方面。
在生物帮那里可有找到详细的说明，可以去那里查找一下，生物帮是生物行业门户网站，信息比较全面的，我平时就喜欢到那里找资料。可以去 那里了解一下。
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