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免疫标记分析技术主要包括：放射物标记、酶标记、发光标记、荧光标记和金标记方法。 1 放射物标记分析： 用放射物标记抗原或抗体发展的放射免疫分析（radio immunoassay, RIA）是美国科学Yalow 和Berson于1959年创立的一种微量分析法，它是将具有高灵敏度的放射性核素示踪技术和特异性免疫化学技术相结合而建立的新方法。该技术利用核素标记物的放大效应，改善了待测物的检测下限，同时以抗体或抗原作为结合试剂，大大提高了检测方法的特异性。 2 荧光标记分析： 以荧光标记的荧光免疫分析（fluorescein immunoassay, FIA）是由Conn等首创于20世纪40年代的一种标记免疫学技术，其所用标记物是荧光素和荧光染料，是将抗原或抗体标记以荧光物质与相应抗原或抗体结合，在荧光显微镜或紫外线照射下，检测荧光强度和荧光现象的一种检测方法。
荧光标记免疫法灵敏度高，但荧光素常会产生生物学毒性，导致抗体或抗原的灵敏度和选择性下降 3.酶标记分析技术： 是继免疫荧光抗体技术和放射免疫分析之后发展起来的一大新型的血清学技术。1966年，Nakane等和Avrameas等分别报道用酶代替荧光素标记抗体，建立了酶标抗体技术（enzyme-labelled antibody technique），用于生物组织中抗原的定位和鉴定。1971年，Engvall Van Weemen等报道了酶联免疫吸附试验，从而建立了酶标抗体的定量检测技术。20世纪80年代，基于酶标记抗体检测和鉴定蛋白质分子的免疫转印技术问世。目前，免疫酶标记技术已成为免疫诊断、检测和分子生物学研究中应用最广泛的免疫学方法之一。 4.发光标记分析 20世纪80年代末，国外开始用化学发光试剂来标记抗原或抗体，从而建立了发光免疫分析技术。
狭义的发光免疫分析（ luminescence immunoassay,LIA ）主要是指化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay, CLIA）。另外，还有酶放大化学发光免疫分析和电化学发光免疫分析（ electrochemiluminescence immunoassay , ECLIA）。CLIA是Sohrocler和Halman在20世纪70年代末期建立的，该方法兼有发光分析的高灵敏度和免疫反应的特异性。其基本原理同酶标记分析法，是用化学发光反应的试剂（可以是发光剂或催化剂等）标记抗原或抗体， 标记后的抗原和抗体与待测物经过一系列的免疫反应和理化步骤（如离心分离、洗涤等），最后以测定发光强度形式测定。 5 超顺磁微粒标记分析 以磁性粒子标记的磁性免疫分析技术（Magnetic Immuno Chromatofraphic Tes,tMICT）是现代物理学与生物技术结合研发生产的磁性分析检测技术，最早应用于基础医学领域[13,14]。
与其它标记技术不同，该技术一个显著的优点就是用磁性粒子标记不受有色杂质干扰，可用于直接测量血液、食品、污水等有色样品。其原理是利用超顺磁性纳米微粒作为标记物，由高灵敏度磁性检测仪器测定结合在免疫复合物上的磁性微粒所产生的局部磁场效应，从而得出所测分析物的定量结果。
关于细胞免疫荧光染色的问题
(1)你的二抗是用FITC标记的，为避免荧光分解，分装及荧光显微镜观察时均要避光；
(2)封片最好用甘油加0.5mmol/L pH9.0-9.5的碳酸氢盐缓冲液，后者能使玻片透明；
(3)关于免疫酶染色，如果是用过氧化物酶做标记，就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶；2N盐酸需要使用，目的是使DNA变性，让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu结合。
做间接法免疫荧光染色，如何设置对照？
参考见解：最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照，看是否非特异性染色。
(1)空白对照：如果你做的是石蜡切片免疫组化，这个对照必须有，目的是看自发荧光，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察。
(2)阴性对照：标本直接滴加二抗，呈阴性反应。
(3)抗原对照：标本加同种动物的未免疫血清，以PBS冲洗后，在加抗免疫球蛋白荧光抗体。因未免疫动物的血清中无特异性抗体，应呈阴性反应。
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