[如何制作细菌和放线菌培养基]、目的要求 了解半合成和合成培养基的配制原理。学习和掌握肉膏蛋白胨培养基、LB培养基和高氏合成一号培养基的配制方法。二、基本原理 肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养...+阅读
(一)麦芽汁培养基的配制 1.培养基成分 新鲜麦芽汁一般为10-15波林。 2.配制方法
(1)用水将大麦或小麦洗净,用水浸泡6-12h,置于15℃阴凉处发芽,上盖纱布,每日早、中、晚淋水一次,待麦芽伸长至麦粒的两倍时,让其停止发芽,晒干或烘干,研磨成麦芽粉,贮存备用。
(2)取一份麦芽粉加四份水,在65℃水浴锅中保温3-4h,使其自行糖化,直至糖化完全(检查方法是取0.5ml的糖化液,加2滴碘液,如无蓝色出现,即表示糖化完全)。
(3) 糖化液用4-6层纱布过滤,滤液如仍混浊,可用鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20 m1,调匀至生泡沫,倒入糖化液中,搅拌煮沸,再过滤)。
(4)用波美比重计检测糖化液中糖浓度,将滤液用水稀释到10-15波林,调pH至6.4。如当地有啤酒厂,可用未经发酵,未加酒花的新鲜麦芽汁,加水稀释到10-15波林后使用。
(5)如配固体麦芽汁培养基时,加入2%琼脂,加热融化,补充失水。
(6)分装、加塞、包扎。
(7)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(二)马铃薯葡萄糖培养基的配制
1、培养基成分 马铃薯 20g 葡萄糖 2 g 琼脂 1.5-2g 水 100ml 自然pH 2.配制方法
(1)配制20%马铃薯浸汁 取去皮马铃薯200g,切成小块,加水1000m1。80℃浸泡lh,用纱布过滤,然后补足失水至所需体积。100 Pa灭菌20 min。即成20%马铃薯浸汁,贮存备用。
(2)配制时,按每100 m1马铃薯浸汁加入2g葡萄糖,加热煮沸后加入2g琼脂,继续加热融化并补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(三)豆芽汁葡萄糟培养基的配制 1.培养基成分 黄豆芽 10g 葡萄糖 5g 琼脂 1.5-2g 水 100ml 自然pH 2.配制方法
(1)称新鲜黄豆芽10g,置于烧杯中,再加入100 m1水,小火煮沸30 min,用纱布过滤,补足失水,即制成10%豆芽汁。
(2)配制时,按每100 m1 10%豆芽汁加入5g葡萄糖,煮沸后加入2 g琼脂,继续加热融化,补足失水。
(3)分装、加塞、包扎。
(4)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。
(四)察氏(czapck)培养基的配制 1.培养基成分 蔗糖 3g NaN03 0.3g K2HP04 0.1g KCl 0.05g MgSO4·7H2O 0.05 g FeS04 0.001 g 琼脂 1.5-2g 蒸馏水 100ml 自然pH 2.配制方法
(1)称量及溶化 量取所需水量约2/3左右加入到烧杯中,分别称取蔗糖、NaNO3 、K2HP04 、KCl、MgSO4。
依次逐一加入水中溶解。按每100 ml培养基加入1ml 0.1%的FeS04溶液。
(2)定容 候药品全部溶解后,将溶液倒入量筒中,加水至所需体积。
(3)加琼脂 加入所需量琼脂,加热融化,补足失水。
(4)分装、加塞、包扎。
(5)高压蒸汽灭菌 100 Pa灭菌20 min。 YPD培养基 YPD 或YPED,:Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(1L),又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基,加入琼脂的又叫酵母膏胨葡萄糖(YPD)琼脂培养基 用于酵母菌的培养 配方:1% Yeast Extract(酵母膏) ,2% Peptone(蛋白胨) ,2% Dextrose (glucose)(葡萄糖),若制固体培养基,加入2%琼脂粉 配制方法: 1 溶解10gYeast Extract(酵母膏), 20gPeptone(蛋白胨)于900ml水中,如制平板加入20g琼脂粉 2 高压 121度 20min 3 加入100ml 10*Dextrose (glucose)(葡萄糖),(葡糖糖溶液灭菌后加入) 注:葡萄糖,yeast extract ,peptone溶液混合后在高温下可能会发生化学反应,导致培养基成分变化,所以要分别灭菌后再混合。
YPEG:除了用3%乙醇和3%甘油代替葡萄糖作为碳源外,其他成分同YPD
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