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1、如果有标准曲线，按照标准曲线计算；
2、一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算；
3、引物或探针降解：可通过PAGE电泳检测其完整性；
4、模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起；
5、看CT值是分析荧光定量PCR最直观的一个数据，CT值一般在35左右就失去参考价值了，平时我们实验室用BIODAI-PCR荧光定量法测得的扩增曲线的起跳值基本在30左右。
扩展资料：
PVR的循环参数：
1、预变性；
模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要，加热时间参考试剂说明书。
2、变性步骤；
循环中一般95℃，30秒足以使各种靶DNA序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不彻底，易造成扩增失败。
3、引物退火；
退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的Tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对PCR的特异性有较大影响。
4、引物延伸；
引物延伸一般在72℃进行（Taq酶最适温度）。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般推荐在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。
5、循环数；
大多数PCR含25-35循环，过多易产生非特异扩增。
6、最后延伸；
在最后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟.使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。
参考资料来源：百科—实时荧光定量PCR
如何分析real time PCR的数据结果
学习做Realtime PCR， 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间，熔
融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁.不同的处理方法得到不
同的结果.
做的是相对定量，SYBR Green， 选用2^（-△ △ Ct）法
内参基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
目的基因：对照组1、对照组2、对照组3
实验组1、实验组2、实验组3
数据处理的时候，是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到
还有对于内参基因的数据，如果所得Ct 值差值在1 以内，是否可以将所有的内参取平均，
另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的
内参基因： 18s for control, 18s for treatment sample
目的基因： control sample, treatment sample
复孔取平均值
△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control
△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample
△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample
2^（-△ △ Ct）
2^（-△ △ Ct） =1 means miRNA expression no change
2^（-△ △ Ct） 1 means expression increase after treatment
如何分析 realtime PCR结果
学习做Realtime PCR， 实验结果是出来了，得到的内参、目的基因的Ct 值在15-25 之间，熔融曲线基本上也是单峰，但不太会处理这个结果，对着数据发愁.不同的处理方法得到不同的结果.做的是相对定量，SYBR Green， 选用2^（-△ △ Ct）法内参基因：对照组
1、对照组
2、对照组3实验组
1、实验组
2、实验组3目的基因：对照组
1、对照组
2、对照组3实验组
1、实验组
2、实验组3数据处理的时候，是先分别取内参、目的基因的三次平行实验的均值再拿相应均值相减得到还有对于内参基因的数据，如果所得Ct 值差值在1 以内，是否可以将所有的内参取平均，另外对于这个REAL-TIME PCR 的结果除了用EXCEL 处理之外有没有其他比较可信方便的内参基因： 18s for control, 18s for treatment sample目的基因： control sample, treatment sample复孔取平均值△ Ct for control sample = Ct of comtrol sample - Ct 18s for control△ Ct for treatment sample = Ct of treatment sample - Ct 18s for treatment sample△ △ Ct = △ Ct for treatment sample - △ Ct for control sample2^（-△ △ Ct）2^（-△ △ Ct） =1 means miRNA expression no change2^（-△ △ Ct） 1 means expression increase after treatment...
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