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安妮本出生在一个富有的德籍犹太人家里，为了躲避纳粹党的残害而移居荷兰，不久，纳粹党占领了荷兰，便开始四处搜捕居住在荷兰的犹太人，安妮的姐姐玛格收到了被拘捕的传票，因此安妮一家便提前开始了秘密小屋的生活。随即，温达安先生一家和牙医迪赛儿也先后搬进了秘密小屋。在秘密小屋里，他们有严格的作息时间，白天不能随意活动，以免被工厂的工作的人发现，只有在晚上所有人都离开后，他们才能放心的自由活动，也只有在这时安妮才能隔着窗帘看看外面的世界。
在秘密小屋的生活中，每个人都变得十分敏感而且容易受到惊吓，一阵陌生的脚步声，一串奇怪的敲门声都使他们如惊弓之鸟，食物殆尽、互相的不容忍、争吵使原本就紧张的生活变得更加难熬。他们失去了自由，只能躲在狭小的房间里，这一切，都反映了躲避起来的犹太人紧张不安的心理与他们凄苦的逃亡生活。他们也从朋友的叙述、收音机、窗外的情景中了解到了许多外面世界的消息，有喜有悲，悲的是德国纳粹不断地搜捕犹太人，将他们赶往集中营，妇女、小孩、老人、病人无一能幸免，在集中营里强奸、毒杀时有发生，那里的犹太人的最终命运便是死亡。
喜的是盟军一步步登录的消息，这给了秘密小屋里的人无限的希望，他们渴望着自由，希望能再次拥有自由。然而由于他人告密，秘密小屋中的所有人均被关入集中营，日记被迫中断。 另一方面，在阁楼中度过的25个月也是安妮开始进入青春期的时期，她的生理上、心理上的每一个细微的变化都被真实地记录下来了，因此《安妮日记》也是一位少女成长过程的真实记载。
在开始记日记时，安妮称自己为“安妮”，逐渐地，她改称自己为“安妮·弗兰克”，认为自己已经是个大人了。在当年的阁楼，今天的安妮·弗兰克纪念馆的墙上，有一道道铅笔做的记号，这是安妮记录的自己的身高变化。她第一次有了月经，非常激动，因为这是个“非常重要的事”。安妮甚至非常坦率地谈到了自己对性的朦胧的好奇，她称自己看到女性的裸体总是非常“激动”。
在阁楼里，她还和彼德一起偷偷研究他们养的猫的生殖器官，并对彼德能如此冷静地谈论“性”感到非常钦佩。 《安妮日记》还真实地记录了作者对周围人的各种观点，例如她对父母的婚姻关系非常担忧，因为她觉得他们已经不再相爱了，并对父亲与丹恩太太的调情非常反感（这几页的内容直到安妮的父亲去世后才被公开）。另一方面，安妮也尝试着在心理方面走向成熟。
在避难的日子里，安妮惊讶地发现自己的日记中竟然有这么多埋怨妈妈的句子，她终于意识到自己必须学会与她们相处。她试着和妈妈、姐姐交谈，与姐姐交换各自的日记，学习沟通与了解。
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